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El nuevo MVE HE 800 C - La eficiencia se une al rendimiento

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Mon, 05 May 2025 08:56:39 GMT

La eficiencia se une al rendimiento

El MVE HE 800 C es un nuevo congelador de alta eficiencia, que establece un nuevo estándar de capacidad, seguridad y sostenibilidad.

Diseñado para laboratorios, biobancos y centros de fertilidad que exigen fiabilidad, el HE 800 C ofrece:

�� Almacenamiento seguro y de alta capacidad para muestras biológicas críticas.

�� Eficiencia mejorada con un consumo reducido de LN₂.

⚙️ Experiencia de usuario mejorada con una ergonomía superior

✅ Preparado para el cumplimiento de las normas mundiales de calidad y seguridad

Tanto si gestiona un único laboratorio como una red de distribución global, el HE 800 C aporta tranquilidad y valor a largo plazo.

Artículos de referencia

Fri, 05 Jan 2024 10:46:22 GMT

Avances importantes

Ha habido avances importantes en la crioconservación en los últimos años, sobre todo con la publicación de 3 artículos de referencia:

El primero de ellos (Fahy GM, Wowk B, Pagotan R, Chang A, Phan J, Thomson B, Phan L. Physical and biological aspects of renal vitrification. Organogenesis. 2009 Jul;5(3):167-75. doi: 10.4161/org.5.3.9974. PMID: 20046680; PMCID: PMC2781097) describe la conservación a temperaturas criogénicas de un riñón de conejo que se trasplantó de nuevo en el animal tras volver a su temperatura corporal. El conejo sobrevivió y el riñón funcionó con normalidad, pero este estudio solo demuestra que la crioconservación de órganos pequeños es posible. Para conservar órganos más grandes, como son los humanos, habrá que seguir investigando.

Otro estudio (Vita-More N, Barranco D. Persistence of Long-Term Memory in Vitrified and Revived Caenorhabditis elegans. Rejuvenation Res. 2015 Oct;18(5):458-63. doi: 10.1089/rej.2014.1636. Epub 2015 Aug 20. PMID: 25867710; PMCID: PMC4620520) se fija en la crioconservación y reanimación de un gusano que revivió y conservó sus recuerdos codificados en la estructura neural permaneciendo tras la reanimación.

Y el tercero, (McIntyre RL, Fahy GM. Aldehyde-stabilized cryopreservation. Cryobiology. 2015 Dec;71(3):448-58. doi: 10.1016/j.cryobiol.2015.09.003. Epub 2015 Sep 25. PMID: 26408851), demuestra que la criopreservación también es válida para conservar el tejido neural. Demostró que la criopreservación estabilizada con aldehídos puede conservar las estructuras cerebrales responsables de la memoria y la personalidad. Todo esto demuestra un futuro prometedor aunque será necesaria mucha investigación para seguir avanzando en la materia.

Esperando la vacuna

Wed, 23 Dec 2020 16:37:19 GMT

Una vacuna sirve para protegernos de posibles futuras infecciones. Según la OMS se entiende por vacuna “cualquier preparación destinada a generar inmunidad contra una enfermedad estimulando la producción de anticuerpos”. Sin embargo el proceso para generar una vacuna es más complicado de lo que parece porque requiere realizarlo en unas condiciones muy específicas, libre de gérmenes, y a bajas temperaturas. Cuando el cuerpo recibe una vacuna, produce de forma artificial una primera infección donde se inocula el patógeno y el sistema inmunológico lo reconoce, crea una defensa y aparece la inmunidad de memoria. Por tanto, si el cuerpo se volviera a infectar posteriormente, se generaría una defensa automáticamente.

Aunque el desarrollo de una vacuna puede llevar entre 8 y 10 años, en el caso de la pandemia mundial que estamos atravesando todo se ha acelerado de forma que en lugar de que todos los implicados en el proceso trabajen de forma correlativa, lo han hecho de forma paralela para obtener una vacuna lo antes posible y reducir así el impacto en la economía, las relaciones sociales y también en la mortalidad de la población a nivel mundial. Esta rapidez genera desconfianza pero es evidente que si una vacuna no fuera segura, no sería aprobada. El problema que podemos encontrar es que quizás la vacuna aprobada no sea tan eficaz como se esperaba, pero en cualquier caso, seguro que sirve para que la enfermedad sea menos grave. Desde Kryosfera apoyamos firmemente la vacuna y el transporte seguro de su distribución a toda la población.

Cryoport anuncia un acuerdo para adquirir MVE de Chart Industries

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Wed, 02 Sep 2020 10:11:57 GMT

Cryoport anuncia un acuerdo para adquirir soluciones biológicas MVE de Chart Industries

Cryoport líder global en soluciones de cadena de suministro de temperatura controlada para la industria de las ciencias de la vida, ha anunciado estos dias que ha firmado un acuerdo para adquirir MVE Biological Solutions ("MVE"), líder global en la fabricación de productos aislados al vacío y sistemas de congelación criogénica para la industria de las ciencias de la vida, de Chart Industries, Inc. (NASDAQ: GTLS). Esta adquisición es un paso más en el cumplimiento de la misión de Cryoport de ser "el socio preeminente de la industria de las ciencias biológicas para las soluciones de la cadena de suministro de temperatura controlada" al ampliar su huella de soluciones y servicios a la industria de las ciencias biológicas y, en particular, al mercado de células y genes de rápido crecimiento. Con las adquisiciones de MVE, CryoPDP y Cryogene, Cryoport proporcionará soluciones totalmente integradas y de extremo a extremo de la cadena de suministro a los clientes de terapias celulares y genéticas, así como a la industria de las ciencias de la vida en general.

Cryoport, Inc.

Como compañía de Cryoport, MVE ampliará el papel de Cryoport en el ecosistema de la cadena de suministro de terapia celular y genética, un negocio que se prevé que crezca entre un 30% y un 40% al año, y mejorará aún más la posición de Cryoport como líder en el suministro de soluciones criogénicas para la industria de las ciencias de la vida. Bajo el acuerdo, Cryoport adquirirá MVE en una transacción en efectivo valorada en 320 millones de dólares. El cierre se espera para finales de año, sujeto a la aprobación regulatoria y a las condiciones habituales de cierre, los ingresos de MVE para 2019 fueron de aproximadamente 83,7 millones de dólares y se espera que aumenten inmediatamente.

Es verano

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Sat, 25 Jul 2020 09:15:58 GMT

Es verano, palabra que nos recuerda al buen tiempo, desconexión, lecturas, descanso,... En los tiempos de incertidumbre que vivimos ¿habéis pensado en hacer vacaciones?

Este año, el coronavirus ha cambiado la perspectiva de muchos asuntos, entre ellos el de las vacaciones. Habrá quien piense si tiene sentido hacerlas viendo las restricciones de movilidad que hay y los rebrotes que siguen creciendo.

La pandemia nos ha traído muchos retos y con ellos, un nivel de exigencia y de compromiso muy elevado, tanto a nivel profesional como familiar. Los equipos de trabajo, es evidente que estamos experimentando cansancio, estrés y un equilibrio entre vida profesional y familiar que no siempre llevamos de forma adecuada. Por ello, creo en la necesidad de tomarse unos días de descanso, para desconectar y, lo más importante, disfrutar de los que más te gusta y volver a coger energías. Dediquemos algunos días para recargarnos y volver mejores que nunca. Hagámoslo por turnos y volvamos a ser un equipo de trabajo fuerte.

Reproducción asistida y coronavirus

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Thu, 30 Apr 2020 11:49:18 GMT

La actual crisis sanitaria ha afectado también al sector de la reproducción asistida. Muchas mujeres o parejas que desean tener un hijo han visto cómo todas sus ilusiones quedaban al menos en suspenso hasta que todo esto termine. Por ello la solución más adecuada sería congelar los embriones para utilizarlos cuando se supere esta crisis. De este modo, y sobre todo si se trata de mujeres de edad avanzada, podemos asegurar que podrán seguir utilizando sus propios óvulos más adelante. Mediante la vitrificación, que es la técnica más avanzada que la criopreservación, se ofrece una mayor supervivencia de óvulos, embriones, o espermatozoides porque los congela más rápido, permitiendo una tasa de supervivencia más alta.

Kryosfera empatiza con el personal sanitario y el gran esfuerzo que está haciendo en la lucha contra esta crisis, haciendo una especial mención al personal de estas clínicas que velan por los sueños de muchas mujeres y familias enteras.

Investigación científica & COVID-19

Mon, 30 Mar 2020 17:11:59 GMT

Ante la pandemia del COVID-19 la investigación científica toma una gran relevancia para encontrar una vacuna o tratamiento eficaz cuanto antes. Se han puesto en marcha varios ensayos clínicos en distintos puntos del mundo. Refrigerar y congelar las muestras va a permitir que los investigadores trabajen con ellas ahora y en un futuro.

Precisamente es de actualidad que un equipo de investigadores de Francia ha recuperado un virus atrapado en Siberia, bajo una gran capa de suelo helada, y ha logrado que recupere su capacidad infecciosa. Lo que a simple vista parece una noticia aterradora, es realmente muy interesante desde el punto de vista científico ya que demuestra que la conservación en frío es de gran utilidad a la ciencia. Aunque la investigación genera polémica, no debemos olvidar que sirve para aumentar el conocimiento y por tanto es de utilidad al interés general de la sociedad. El entender y aplicar adecuadamente la criopreservación de material biológico es fundamental en laboratorios de todo tipo y bancos de células.

Desde Kryosfera animamos a los científicos en su labor y confiamos plenamente en ellos.

Congelar la flora intestinal curará enfermedades en un futuro próximo

Mon, 07 Oct 2019 11:44:14 GMT

En España ya hay 2 bancos de heces disponibles

Hay días que nos levantamos con buenas noticias como esta que leía hoy desayunando “Congelar la flora intestinal curará enfermedades en un futuro próximo”. Y es que como ya ha pasado con el cordón umbilical y las células madre, conservando los microorganismos digestivos, los especialistas podrán tratar infecciones mejorando la eficacia de sus tratamientos.

Congelar y almacenar la flora intestinal ya es posible. Concretamente en España hay 2 bancos de heces disponibles que permiten preservar la microbiota durante años por si esta se viera dañada en el futuro. La alimentación y vida sedentaria influyen en nuestro sistema digestivo de manera negativa siendo cada vez mayores los casos de cancer de colon. Los bancos que conservan estos microorganismos permiten, entre otras cosas, recuperar cepas y especies que, por los motivos que sean, se han perdido y no dejan que funcionen por ejemplo los tratamientos de quimioterapia.

Conservar la diversidad microbiana, sin duda, permitirá mejorar nuestra salud futura.

Fuente: https://www.pressreader.com/spain/a-tu-salud-be/20190922/281831465450127

Nueva Adjudicación en el IDIBELL

Wed, 02 Oct 2019 12:11:37 GMT

Adjudicación contrato de suministro e instalación de un tanque de nitrógeno líquido en el IDIBELL

El Institut d'Investigacio Biomedica de Bellvitge (IDIBELL) ha adjudicado a Kryofera Solutions SL el suministro e instalación de un tanque criogénico, modelo MVE 1542R, por un importe de 47.745,00 € IVA incluido.

El proyecto se enmarca dentro de los Fondos FEDER 2019 y servirá para dotar a la sala criogénica del Hospital de un tanque de alta eficiencia en fase vapor con capacidad de hasta 42.000 muestras.

SEGURIDAD DEL PERSONAL Y DE LAS INSTALACIONES

Sun, 16 Sep 2018 16:43:43 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (12)

Preguntas clave:

· ¿Existe un análisis de riesgos?

· ¿Está todo el personal adecuadamente capacitado?

· ¿Se prueba todo el equipo de seguridad?

En cualquier instalación, se debe realizar una evaluación de riesgos para observar las acciones que podrían ser peligrosas o ir mal y, a continuación, cualquier procedimiento debe incorporarse en un Procedimiento Operativo Estándar (SOP). Esto es para garantizar que la seguridad de la muestra y del operador (y otros) no se vea comprometida.

Se necesita entrenamiento y revisiones periódicas para todos los involucrados en el uso de LN. Hay muchas compañías que ofrecen capacitación para el manejo seguro de LN y puede valer la pena tener cursos regulares para que los operadores complementen las medidas internas y los SOP.

· Es sensato dividir las consideraciones de seguridad personal en áreas separadas para dar algunos ejemplos de riesgos y su prevención. Las áreas más comunes son Almacenamiento, Uso de LN, Equipo de Protección Personal (PPE) y Eliminación de Desechos o Excedentes. Vea el capítulo anterior para sugerencias sobre Transporte.

Almacenamiento

Los dos principales peligros con el almacenamiento de LN son la asfixia del gas nitrógeno ya que desplaza el aire y las quemaduras por las salpicaduras durante el manejo. En el exterior del edificio, LN debe almacenarse en conformidad, por lo general dentro de un recinto cerrado con paredes de malla que proporcionan una amplia ventilación y protección naturales. El almacenamiento dentro de un edificio puede ser peligroso porque puede ocurrir una acumulación significativa, aunque desconocida, de gas en un espacio confinado.

Por lo tanto, cuando se considera una ubicación adecuada para el almacenamiento interno de LN, se debe considerar:

· Ventilación

· Tamaño de la habitación

· Volumen máximo de LN a almacenar.

· Visibilidad externa del área de trabajo

· Puntos de alarma adecuados (internos y externos)

· Llenado

· Transporte

Uso de LN

Posibles problemas en el uso de LN:

· Relacionado con el vapor: hasta un 10% del líquido de relleno puede evaporarse durante un proceso, por lo que debe realizarse en un área adecuadamente ventilada.

· Relacionados con la temperatura: pueden producirse quemaduras frías severas por el contacto de la piel con el líquido u objetos enfriados por el líquido o el vapor. Por ejemplo, la piel puede congelarse en superficies metálicas frías y otros materiales, p. tubería. Las tuberías pueden volverse frágiles en bajas temperaturas y puede romperse o agrietarse.

Equipo de protección personal (PPE)

El PPE debe considerarse como el último "escudo" en lugar de la primera defensa y las buenas prácticas deben usarse para evitar riesgos en primer lugar. Sin embargo, siempre se necesitará PPE cuando se usa LN.

Cara : las salpicaduras deben considerarse como posibles durante cualquier operación de vertido. Las opciones de PPE son:

· Gafas

· visera de cara completa

· visera de cara completa con mentonera

Nota: Las gafas de protección solo protegen los ojos. Una visera protege los ojos y la cara; aún es posible que salga líquido debajo de la visera. La protección debe ser a un estándar nacional, p. el BS EN 166 grado 3 del Reino Unido.

Manos : las manos deben estar protegidas con guantes especiales, de nuevo con un estándar, p. BS EN 511-protección en frío. Se debe considerar la posibilidad de que LN salpique en el guante a través del área del manguito. Los guantes sueltos de longitud estándar son más susceptibles de permitir LN. Las alternativas son guantes largos o guantes estándar con puños elásticos.

Cuerpo : Las salpicaduras en el cuerpo son un riesgo probable, y se debe usar un delantal, de acuerdo a la norma correspondiente. Estos son normalmente de tela no tejida y no tienen bolsillos, y deben ser lo suficientemente largos como para proteger la parte inferior de las piernas.

Pies y piernas : también necesitarán protección. Los zapatos y sandalias con punta abierta no son en absoluto sensatos y deben suministrarse calzado adecuado. Si se usan botas, los pantalones deben usarse fuera de las botas.

Infección : se ha informado en la literatura científica que los tanques de LN pueden contaminarse con virus, bacterias, hongos y células. En un incidente, la contaminación (virus de la hepatitis B) parece haber sido transmitida a los pacientes del hospital. Los procedimientos de descontaminación pueden ser necesarios antes de la manipulación.

Almacenamiento de crioviales en el LN (fase líquida) : este proceso puede presentar un posible riesgo de explosión al descongelarse, en caso de que se produzcan fugas en el contenedor del vial; se debe implementar un procedimiento de manejo adecuado.

Asfixia

La concentración normal de oxígeno en el aire que respiramos es aproximadamente del 21%. La concentración, el pensamiento y la toma de decisiones se deterioran cuando disminuye la concentración de oxígeno.

Estos efectos a menudo no son perceptibles para el individuo afectado. A medida que la concentración de oxígeno en el aire disminuye, los riesgos de asfixia se vuelven significativos.

Entonces, cualquier agotamiento de oxígeno por debajo del 21% debe ser tratado con preocupación: es esencial entender que, con gases inertes, como el nitrógeno, la asfixia es traidora, es decir, ¡no hay señales de advertencia!

Los monitores personales ofrecen protección para aquellos que ingresan o trabajan regularmente en un entorno donde la composición del aire circundante puede empeorar. Hay un gran número de monitores y alarmas de agotamiento de oxígeno personal disponibles, pero estos no deben usarse como primera línea de protección; Los monitores fijos de deficiencia de oxígeno con alarmas repetidoras externas siempre deben instalarse cuando se usa LN.

Transporte

Hay algunas cosas que se deben y no se deben hacer para transportar LN dentro y alrededor de una instalación, y siempre se necesita un análisis de riesgo. Se deben incluir espacios confinados donde los contenedores de LN no deberían ir acompañados, como en ascensores, y donde los contenedores no deberían almacenarse temporalmente sin agotamiento de oxígeno y equipos de seguridad instalados. De manera similar, el uso de carros y bases de rodillos debe analizarse cuidadosamente, así como el transporte de cilindros a través de áreas externas, en caso de que las superficies no sean lisas.

Eliminación

Las reglas internas e institucionales pueden y probablemente regirán la disposición segura del LN excedente. Como regla general, a menudo se permite que se evapore de forma natural en una campana extractora de humos o en un área bien ventilada y no se debe verter LN en el fregadero o desagüe.

Lo anterior no es exhaustivo y, por supuesto, la capacitación y las evaluaciones de riesgos deben realizarse bajo la dirección de personal debidamente capacitado.

Hay una serie de cortometrajes disponibles que también pueden ayudar. Por ejemplo, "Llenado y mantenimiento de tanques de nitrógeno líquido", producido por la instalación de criogenia de la Universidad Northwestern. Cubre el llenado y mantenimiento de tanques de nitrógeno líquido y discute los riesgos de seguridad del nitrógeno líquido, prácticas de trabajo seguras para controlar el riesgo, partes y características de seguridad de un tanque de nitrógeno líquido, procedimientos básicos para dispensar nitrógeno líquido y llenar recipientes de almacenamiento, transportar y almacenar nitrógeno líquido y pasos a seguir en caso de emergencia.

Este y otros similares están disponibles en YouTube:

https://www.youtube.com/watch?v=fGMgl-O4M5M

CONTROLADORES

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Tue, 04 Sep 2018 07:58:55 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (11)

Preguntas clave:

· ¿Simple o sofisticado?

· ¿Pueden ser compatibles los controladores de diferentes fabricantes?

· ¿Cuáles son los beneficios de los controladores que se comunican?

La cantidad de fabricantes de recipientes criogénicos no es grande y la mayoría de la gente pensaría en Chart / MVE, Taylor Wharton / Worthington, CBS, Wessington, Air Liquide, CryoDiffusion, Cryotherm y algunos fabricantes e instaladores más pequeños.

La pregunta subyacente es si el equipo de diferentes fabricantes se puede instalar y vincular en la misma ubicación.

La respuesta simple es "posiblemente" y, por lo tanto, cuando se busca otro equipo, un primer requisito es su compatibilidad con una base instalada actual. Entonces, con los controladores para los vasos de LN se aplican los mismos pensamientos.

La mayoría de los usuarios piensan en el controlador como el bit electrónico que llena y alarma y, aunque eso es correcto, hay uno o dos parámetros que pueden configurar los sistemas. Como una breve inmersión en los aspectos técnicos: las unidades funcionan leyendo un conjunto de sensores o utilizando un interruptor diferencial de presión para determinar el nivel y, por lo tanto, los controladores a menudo no se pueden cambiar entre buques.

La buena noticia es que, a menos que se ejecute un sistema de llenado por completo (OFAF), los controladores no necesitan 'hablar' entre sí, por lo que la compatibilidad no siempre es un problema. Sin embargo, para un control óptimo, necesitan interactuar (llenado simultáneo, llenado temporizado, desgasificación, etc.) y, por lo tanto, se debe considerar la compatibilidad o un sistema multifuncional.

También hay otras consideraciones; la monitorización es uno.

"¿Pueden todos los controladores hablar con el mismo sistema de monitorización?"

Algunos de los nuevos controladores están mejor equipados para integrarse con sistemas de alarma y monitorización que, además de monitorización independiente, también pueden enviar datos directamente a un archivo.

Un buen punto para recordar con respecto a la alarma y la monitorización es que si los controladores son compatibles, reducirá en gran medida el número de puntos de monitorización necesarios, lo cual, a su vez, reduce la cantidad de sensores adicionales requeridos. Por lo tanto, puede ser más económico invertir más en el controlador para reducir los costes en general a través del sistema de alarma / monitorización.

Además, si bien puede parecer bien mezclar y combinar, también se debe considerar el servicio y el mantenimiento: puede hacer una diferencia de costes al necesitar el uso de diferentes organizaciones de soporte.

Existen formas de combatir la incompatibilidad y algunos proveedores proporcionan controladores para todas las marcas de dewars para garantizar que los sistemas como OFAF y la conexión de alarma sigan siendo simples.

Por ejemplo, CryoFill, de la compañía holandesa Cryo Solutions, es una opción independiente disponible para controlar, monitorizar y alarmar. Puede funcionar con los estándares industriales para medición de nivel, presión diferencial o medición de sensor de punto.

Para mayor claridad, la pantalla táctil cambia de color cuando hay una alarma y simplificaría los Procedimientos Operativos Estándar.

Por otro lado, algunos compradores podrían preferir la uniformidad del suministro de un solo proveedor de fuente y controlador.

EL SUMINISTRO ADECUADO DE NITRÓGENO LÍQUIDO

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Wed, 18 Jul 2018 10:43:36 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (10)

Preguntas clave:

· ¿Es un generador de LN una opción?

· ¿Cuál es el coste por litro?

· ¿Es mi sitio adecuado para un tanque a granel? Si es así, ¿fijo o móvil?

· ¿Cuáles son las consideraciones de seguridad?

Un requisito previo esencial para establecer una instalación de almacenamiento de LN es claramente una fuente apropiada y confiable de LN, con volúmenes garantizados y frecuencia de suministro según sea necesario.

Los factores que influyen en la forma en que se establece el suministro de LN incluirán el acceso y el espacio disponible y la logística involucrada en la operación de la instalación, así como los resultados de los análisis de seguridad y riesgo.

Cilindros de suministro

La opción de suministro de LN para la instalación es, en la mayoría de los casos, entre unos cilindros de suministro más pequeños, que pueden ser móviles o montados externamente, y un gran tanque externo a granel.

Si no es posible ubicar un tanque externo, esto no impide el uso de recipientes grandes y automáticos, pero habría que considerar cuidadosamente el suministro de LN y las consideraciones de seguridad.

Si el almacenamiento se encuentra en la planta baja de un edificio grande y accesible, por ejemplo, entonces un tanque externo y tuberías pueden ser una buena opción. Incluso en los pisos superiores de algunos edificios a menudo es posible colocar tanques en el techo si se usa el equipo correcto.

Los tanques externos (generalmente a granel) se conectan, a través de tuberías aisladas al vacío, a los recipientes de almacenamiento a través de sistemas de desgasificación, con protección tal como válvulas de cierre. Estos sistemas son algo complicados, necesitan una planificación cuidadosa y detallada y, como es de esperar, son caros en la instalación; pero, para instalaciones más grandes, pueden tener sentido económico a largo plazo.

Los cilindros de suministro se usan más generalmente en instalaciones más pequeñas o donde, logísticamente, no es posible la colocación de tanques a granel.

Si el almacenamiento se realiza en un piso superior de un complejo de edificios, por ejemplo, tal vez uno o más cilindros portátiles sean la única solución práctica.

Los cilindros de suministro de LN pueden ocupar una cantidad importante de espacio en el piso (a menos que estén enjaulados en el exterior) y pueden requerir mucha mano de obra cuando se cambian los tanques vacíos por otros llenos. Sin embargo, la interrupción causada por la extracción y el retorno de los cilindros puede evitarse, en algunas circunstancias, instalando un punto de llenado externo.

Donde el uso es relativamente alto, pero un tanque de suministro a granel no es una opción disponible, entonces podría considerarse un dispositivo de conmutación para permitir que múltiples cilindros formen un suministro de LN virtual de alta capacidad. También es posible utilizar sistemas, como la "igualación de presión" para garantizar que se usen múltiples tanques de suministro proporcionalmente por igual. Esto hace que la recarga regular sea una tarea mucho más fácil de organizar a la vez que maximiza el tiempo entre las entregas del proveedor externo. También debe tenerse en cuenta la cantidad de LN que se debe almacenar y los consiguientes requisitos de seguridad asociados.

La seguridad y la protección, tanto del personal como de la muestra, también deben abordarse durante la fase de diseño, al igual que la ventilación, el cambio y la colocación del panel.

La prueba futura de cualquier instalación es un paso necesario, ya que aunque los recipientes pequeños pueden ser atractivos y parecer la opción más económica y sensata, sus números pueden descontrolarse. Por lo tanto, es necesario considerar el requisito de capacidad eventual para incorporar esto en la fase de planificación inicial.

Alimentación LN

Los problemas críticos aquí son garantizar un suministro garantizado de criógeno con flexibilidad en tiempo y cantidad y con arreglos adecuados para situaciones de emergencia. Es importante decidir desde el principio sobre el sistema de suministro más apropiado. Los tanques a granel pueden ser llenados por las compañías de gas sin intervención, mientras que los cilindros deberán trasladarse desde y hacia su ubicación normal a un área de llenado. Cuando esto no sea posible, se pueden usar mecanismos de llenado separados a través de puntos de llenado externos. Estos puntos de llenado permiten el llenado remoto de tanques de presión interna conectados a través de sistemas de conmutación, sin necesidad de acceder a edificios ni a mover los cilindros.

Los costes de suministro deben revisarse periódicamente para garantizar una eficiencia óptima; consumir grandes cantidades de LN durante la entrega sería costoso e ineficaz. Por otro lado, esto puede ser más rentable que un sistema elaborado y costoso para reducir el desperdicio, incluso cuando se equilibra con un menor costo de suministro.

La oferta se considera competencia de las grandes compañías de gas, pero también hay proveedores más pequeños e independientes que pueden proporcionar LN. Muchos de estos también ofrecerán recipientes, tuberías y accesorios, y a menudo los ofrecen a precios bajos para ganar contratos de suministro de gas natural licuado. Se debe tener cuidado de que esto no sea una economía falsa ya que el soporte del producto para el equipo criogénico es especializado. Si bien es un experto en el suministro de LN, muchos proveedores no tienen tanta experiencia cuando se trata de diagnosticar por qué sus recipientes tienen alertas.

Al considerar proveedores de LN, puede ser útil verificar si hay otros usuarios dentro del edificio, ya que un "acuerdo por ubicación" negociado puede generar ahorros significativos sin sacrificar la confiabilidad o la regularidad del suministro.

SISTEMAS ONE FILL ALL FILL (OFAF)

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Mon, 09 Jul 2018 10:15:39 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (9)

Preguntas Clave

· ¿Es más eficiente rellenar todos los recipientes a la vez?

· ¿Serán compatibles los diferentes controladores?

Un sistema de tanques en red con un solo relleno (OFAF) permite que varios controladores se conecten entre sí de manera que todos los tanques se llenen cada vez que un controlador en red solicite un relleno. Cuando se conectan varios tanques a una fuente de suministro común, es ventajoso llenar todo al mismo tiempo: las pérdidas de transferencia de LN se reducen significativamente llenando todos los tanques en red mientras el sistema de suministro está cebado y frío. El uso de una red OFAF es más eficiente que el enfriamiento del sistema de suministro cada vez que se llena un tanque individual. Este enfoque también es más eficiente que emplear un sistema 'mantener lleno / mantener frío'. Hasta 100 recipientes autofill se pueden conectar típicamente a una red OFAF. Una red OFAF puede configurarse en dos modos: 'Secuencial' o 'Simultánea'. Para ambos modos, cuando cualquier controlador de la red inicia un relleno, el controlador maestro (por ejemplo, ID OFAF 1) lo reconoce y activa todos los demás controladores para iniciar los rellenos también.

En modo Secuencial OFAF, una vez que el controlador que inició el primer llenado ha alcanzado su Punto de ajuste de nivel alto, el Maestro disparará el tanque con el siguiente ID de OFAF secuencial (por ejemplo, OFAF ID2) hasta que alcance su propio Punto de ajuste de nivel alto. El maestro activará el tanque con la próxima identificación OFAF secuencial para completar y este proceso continuará hasta que todos los tanques de la red, incluido el maestro, hayan alcanzado sus puntos de referencia de alto nivel. En el modo OFAF simultáneo, cuando cualquier controlador inicia un llenado y se llena durante al menos 60 segundos, el Maestro emitirá una señal para todos los tanques, incluido él mismo, para comenzar a llenar. Cada tanque continuará llenándose hasta que se alcance su punto de referencia de alto nivel.

Un usuario seleccionará 'OFAF' secuencial sobre 'simultáneo' si su sistema de suministro no puede mantener la presión de llenado adecuada mientras se llenan varios tanques al mismo tiempo. La OFAF secuencial permite que los tanques se llenen uno a la vez con un sistema de suministro cebado y frío para que sea más fácil para el sistema mantener la presión de llenado adecuada. Usando los sistemas más avanzados disponibles, no existe un límite superior teórico para la cantidad de tanques que se pueden conectar; todos los aspectos se pueden sincronizar para un uso y seguridad óptimos de LN.

Las opciones de llenado programado le permiten al usuario seleccionar el tiempo para comenzar a llenar lo que resulta útil cuando los procedimientos exigen que los usuarios estén en el sitio durante el llenado y para optimizar el uso de LN antes del reabastecimiento del proveedor. Esto resulta particularmente valioso cuando se establece para un día / hora específica para asegurar menos alarmas y llamadas posteriores del personal durante la noche y los fines de semana.

El uso de OFAF, llenado temporizado o ambos también proporciona un mejor análisis del uso de LN y puede usarse para predecir el deterioro del recipiente.

Combinado con los sistemas de monitorización o con el uso del software del fabricante del tanque puede representar una herramienta poderosa para evaluar el funcionamiento del equipo y permitir el mantenimiento preventivo planificado o, en caso de un deterioro por vacío, volver a aspirar o reemplazar el tanque.

Los sistemas secuenciales se completan en el orden de configuración, es decir, cuando el recipiente comienza a llenarse primero. Cuando se alcanza el nivel deseado, el recipiente uno deja de llenarse y se inicia el recipiente dos para comenzar a llenarse. El proceso continúa hasta que todos los recipientes se llenan.

Las ventajas son que el sistema de suministro no está sobrecargado, lo que puede causar caídas de presión. Esto ralentizaría el proceso y todos los buques podrían exceder el tiempo de llenado asignado y saltaría la alarma. La desventaja es que el tiempo necesario para llenar todo el banco de embarcaciones es potencialmente mucho más largo que un sistema simultáneo. Por lo tanto, el llenado secuencial normalmente se usa mejor cuando el número de recipientes es bastante alto y el suministro de LN puede no cumplir con todos los tanques que se llenan al mismo tiempo.

En el sistema Simultáneo, todos los recipientes se llenan al mismo tiempo. Las ventajas y desventajas son las opuestas a las de un sistema de llenado secuencial como se describió anteriormente.

Por lo tanto, el llenado simultáneo generalmente se usa mejor para un número bajo de recipientes o donde el sistema de suministro de LN2 se ha diseñado para garantizar la presión y el suministro no disminuye cuando se usa.

MEJORA Y AUMENTO DE TAMAÑO DE LOS RECIPIENTES

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Thu, 28 Jun 2018 11:51:54 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (8)

Preguntas clave:

· ¿Qué es más barato: muchos recipientes pequeños o uno grande?

· ¿Es mi suministro de LN adecuado para recipientes más grandes?

· ¿Cómo puedo rastrear las muestras?

· ¿Cuáles son los costes logísticos?

Una unidad de trabajo puede comenzar pequeña y por lo tanto el número y tipo de los recipientes de almacenamiento necesarios también pueden ser pequeños. Con el tiempo y a medida que las cargas de trabajo crecen , la necesidad de almacenamiento puede aumentar y el espacio puede convertirse en una limitación.

La gestión, la localización y la recuperación de las muestras se vuelven difíciles al igual que la tarea repetitiva de filmar, monitorizar y grabar niveles y temperaturas. El llenado y la logística pueden convertirse en un pesadilla. En esta etapa, la mayoría de los usuarios deciden que su próximo recipiente será un sistema más grande, tal vez autofill, con un inventario hecho a medida del sistema de almacenamiento.

Si la financiación está disponible, hay muchas razones para mudarse de un número elevado de tanques pequeños a menos grandes. Sin embargo, hay que considerar también los inconvenientes. Los principales inconvenientes suelen ser los costes y la logística de la mudanza.

· ¿Cómo se mueven las muestras de tanques pequeños a grandes?

· ¿Quién va a hacer esto?

· ¿Estarían en riesgo las muestras?

· ¿Qué hay de la cuarentena de muestras?

Traslado a grandes tanques

La primera consideración en relación con el paso de un contenedor pequeño a uno más grande es alrededor de la seguridad de la muestra. ¿Hay más muestras en riesgo si se colocan en un único contenedor en lugar de esparcirse en varios?

El principal riesgo para las muestras, aparte del agotamiento de LN, es el fallo del recipiente. Esto se aplica tanto a los tanques pequeños como a los grandes y la diferencia entre los dos está en el tiempo desde el fallo a cuando las muestras se ven comprometidas. En dewars más pequeños, asumiendo que las alarmas funcionan correctamente, con suerte podríamos tener un día y medio de margen de seguridad; que en la misma situación de riesgo, un tanque más grande podría llegar hasta 21 días.

Generalmente, cuando los tanques pequeños fallan, se calientan; los tanques más grandes tienen la capacidad de implosionar porque una soldadura falla y el LN es atraído hacia el área de vacío y, a medida que se calienta y expande, hace que el recipiente empuje hacia adentro y empuje las muestras hacia arriba.

Almacenamiento en vapor

Una reconsideración de si almacenar en fase líquida o de vapor podría plantearse al mismo tiempo que pensar en un cambio en los vasos más grandes. Hace un tiempo, todas las muestras se habrían almacenado en nitrógeno líquido a -196 ° C, sin embargo, las preocupaciones crecientes sobre la contaminación cruzada hacen que el almacenamiento en vapor se ha vuelto popular. El mayor desarrollo de la tecnología de los recipientes de almacenamiento ha permitido a los fabricantes desarrollar equipos que pueden mantener temperaturas muy inferiores a -150 ° C, algunos de ellos con sus equipos más nuevos, afirman tener -190 ° C de vapor y con total seguridad. Aquí es necesario comparar los riesgos con los beneficios del almacenamiento de líquidos, como una mayor estabilidad de temperatura y tiempos de mantenimiento prolongados.

MANTENIENDO LAS MUESTRAS SEGURAS

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Tue, 26 Jun 2018 08:12:16 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (7)

Preguntas clave:

· ¿A quién pertenecen los materiales a almacenar?

· ¿Qué se requiere como período de almacenamiento viable?

· ¿Se requiere acceso regular a las muestras?

· ¿Se ha especificado la viabilidad/función de la recuperación?

· ¿Cuáles serían las consecuencias de la pérdida de material?

Después de haber sido enfriado en LN durante la criopreservación, la actividad del agua en las células de un sistema biológico será tan baja a nivel de energía química que la difusión molecular, y por lo tanto reacción química, es mínima. La consecuencia práctica es que, en un sistema estable, es realista pensar en un tiempo de almacenamiento de varias décadas para las muestras biológicas preservadas. Tienen que considerarse los riesgos de lesiones debidos a las radiaciones ionizantes, por ejemplo, que podrían acumularse con el tiempo (aunque muy lentamente).

Riesgos por pequeños que sean, deben ser reconocidos y es una buena práctica fijar una fecha para la recuperación y regeneración de una muestra en el momento de su conservación. Una fecha de varias décadas en el futuro puede ser utilizada con confianza, asumiendo que las condiciones de almacenamiento no cambien durante ese tiempo.

Para garantizar la seguridad de la muestra, las restricciones son simples: guardar en o por debajo de las temperaturas correctas y disponer de un sistema de alarma y un equipo de soporte al personal de la instalación con el tiempo de respuesta máximo (8x5, 24x7).

Esto significa, por ejemplo, colocar sensores de alarma de "alta temperatura" en el punto más alto del recipiente; para las muestras almacenadas en líquido, este debe estar por encima del nivel de la muestra más alta almacenada.

Para evitar sobrecargas, los recipientes de almacenamiento de vapor, que necesariamente tienen un depósito de líquido, requieren un sensor de nivel de líquido en el nivel más alto del punto que debe alcanzar el LN. Un sensor de temperatura debe ser empleado por encima del nivel de las muestras almacenadas más altas.

Acceso a las muestras

Adicionalmente, se tiene que considerar la manipulación de las muestras ya que, a veces, las muestras tendrán que ser retiradas del recipiente de almacenamiento y esto tiene que ocurrir sin poner en riesgo las otras muestras, por ejemplo, por calentamiento. La muestra en sí necesita permanecer dentro de una zona del recipiente que esté por debajo de la temperatura necesaria para un almacenamiento seguro. Esto se logra mediante una cuidadosa elección de las soluciones de almacenamiento y trasiego y a menudo determina el tipo de recipiente y el tamaño de la abertura del cuello.

En consecuencia, es muy importante la formación del personal en la colocación y retirada de las muestras. Los nuevos sistemas de almacenamiento incluyen áreas colgantes dentro del cuello de los recipientes que permiten que la muestra sea extraída de una caja o capa sin comprometer la seguridad del tanque.

Cuando el material se almacena en un entorno en producción y los bastidores son regularmente izados hasta la boca del recipiente de almacenamiento para la extracción de la muestra, existe un riesgo real de que las muestras restantes en la parte superior de los niveles de las estanterías de almacenamiento queden expuestos a un ciclo de calentamiento no deseado. Cualquier calentamiento debido a la extracción de la muestra puede ser monitorizado utilizando una sonda de temperatura montada en una muestra ficticia y, cuando se considere necesario, los procedimientos operativos podrán ser modificados. Siempre es una buena práctica tener un Recipiente de respaldo de muestras cuando se trata de entornos en producción.

Seguridad

Para mejorar la seguridad, se debe dividir el material importante entre más de un recipiente de almacenamiento, preferiblemente en diferentes ubicaciones. Las operaciones de depósito y salida de las existencias congeladas deben cumplir los siguientes requisitos registrados y controlados para evitar la pérdida de todo un stock y para indicar cuándo la regeneración o reabastecimiento de las poblaciones debe ser llevado a cabo.

El material almacenado debe mantenerse a la temperatura más baja disponible, al menos por debajo para el tiempo de almacenamiento máximo de las muestras inicialmente congeladas en LN, y -80 ° C para las almacenadas en los congeladores mecánicos. La viabilidad puede perderse progresivamente a temperaturas más altas, incluso con una exposición que equivale a poco más de unos pocos segundos para muestras más pequeñas.

En este punto, vale la pena considerar el impacto de la falla de una unidad de almacenamiento, ya sea un tanque de LN o un congelador mecánico.

¿Hay espacio disponible en otros contenedores de almacenamiento?

¿Hay algún contenedor de repuesto?

La falla del suministro de criogenia también es relevante:

¿Qué sucede si se interrumpe el suministro de LN, o falla el suministro de electricidad?

¿Qué copias de seguridad de emergencia (backups) están disponibles?

Identificación

Las etiquetas de las poblaciones congeladas deberán ser legibles y resistentes a exposición prolongada a temperaturas ultrabajas (LN) así como inmersión en líquido calentado, si se propone utilizarlo durante el recalentamiento y descongelamiento. Se recomienda que la etiqueta en una muestra congelada contenga como mínimo los detalles del tipo de célula/tejido, número de lote, fecha de congelación y la ubicación de la muestra de réplica.

Estas etiquetas deben imprimirse en lugar de estar escritas a mano, pueden ser apropiados los códigos de barras. La ubicación de las muestras debe registrarse y, cuando sea posible, debe estar vinculada a los detalles del origen y las características de la celda, las medidas de control de calidad que se le aplicarán y los criterios de rendimiento que indicarán una recuperación exitosa de la criopreservación.

De la misma manera que para asegurar la seguridad se requiere que las muestras replicadas se almacenen en ubicaciones separadas, lo mismo debería aplicarse a los registros.

TIPOS DE RECIPIENTES LN

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Wed, 13 Jun 2018 07:52:01 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (6)

Preguntas clave:

· ¿Necesita almacenamiento de líquidos o vapores?

· ¿Cuántas muestras se almacenarán?

· ¿Tanques a presión o a granel y tuberías?

Los diferentes tipos de recipientes para el almacenamiento de muestras crioconservadas puede llegar a ser confuso debido a los muchos nombres utilizados, por ejemplo, dewar, tanque, recipiente, cuba, tina, etc. En realidad, hay dos tipos de recipientes: grandes y pequeños . Los recipientes grandes son de acero inoxidable y a menudo referidos como tanques o tanques a granel. Los recipientes pequeños son normalmente de aluminio y más comúnmente conocido como dewars.

El número de muestras a almacenar es el criterio principal , pero hay otros criterios que deben tenerse en cuenta como el tipo de recipiente de muestra - vial, paja, bolsa etc., el acceso necesario, el espacio disponible y los requisitos de instalación.

El tipo de recipiente de almacenamiento final a seleccionar dependerá de la elección entre el almacenamiento en nitrógeno en fase líquida o vapor.

LN generalmente no es estéril y puede contener microorganismos viables.

Habrá significativamente menos organismos contaminantes en el vapor y, por lo tanto, con las preocupaciones crecientes sobre la contaminación cruzada, se ha hecho popular mantener las muestras almacenadas en una "fase de vapor", generalmente por encima de las temperaturas de LN. La fase de vapor generalmente está por debajo de -150 ° C y con equipos más nuevos por debajo de -190 ° C.

¿Vapor o Líquido?

Por lo general, se requiere que el material potencialmente infeccioso se almacene en la fase de vapor o fase gaseosa "seca" del LN para reducir el riesgo de transferencia de organismos contaminantes dentro del LN.

Esto también elimina el peligro de que el LN penetre en las ampollas con fugas que podrían explotar al calentarse.El riesgo de la transferencia también se reduce si se utilizan técnicas correctas de embalaje y manipulación.

El almacenamiento en fase de vapor y "seco" requiere una supervisión muy cuidadosa de los niveles de NL en el recipiente de almacenamiento por el menor volumen de NL contenido que, obviamente, necesitará completarse con mayor frecuencia que en los recipientes de almacenamiento de líquidos convencionales.

Ambos sistemas tienen ventajas y desventajas y, por lo tanto, es sensato evaluar los riesgos asociados a cada sistema antes de elegir el equipo a utilizar.

Hay dos tipos principales de recipiente - el cuello ancho con un LN cámara aislada y los vasos de cuello estrecho con LN debajo la plataforma de almacenamiento. Los recipientes anchos del cuello son más fáciles para el activo almacenamiento, donde las muestras se acceden con mayor frecuencia, y que tienen un mayor consumo de LN a los vasos del cuello estrecho.

Hay dos tipos principales de recipientes: (a) el de cuello ancho con el LN en cámara aislada y (b) los vasos de cuello estrecho con el LN bajo la plataforma de almacenamiento.

Los de Vasos de cuello ancho son más fáciles para almacenamientos activos, donde se accede a las muestras con mayor frecuencia, y tienen un mayor consumo de LN que en los vasos de cuello estrecho.

Tipos y tamaños de buques

· ¿Duración del almacenamiento propuesto?

· ¿Acceso a las muestras?

· ¿Cuánto espacio de piso hay disponible?

Los recipientes de almacenamiento más grandes están hechos típicamente de acero inoxidable y se denominan generalmente depósitos o tanques a granel. Los recipientes más pequeños pueden ser de acero o aluminio y pueden ser referidos como dewars o cilindros, especialmente cuando se utilizan para almacenar o transportar sólo nitrógeno líquido.

La elección del recipiente de almacenamiento dependerá de una serie de criterios:

· El número de muestras que deben almacenarse más cualquier aumento previsto

· Recipiente de muestra deseado, p. ej. frasco, pajita, bolsa

· Configuración de almacenamiento interno, p. ej., bastidores (racks) para viales

· Requisitos de acceso - acceso mínimo o frecuente

· Limitaciones en el espacio del piso y/o acceso a las instalaciones

· Requisitos de llenado, p. ej., autollenado (autofill) o manual

· Facilidad de suministro de LN: tanques externos a granel/dewars internos de almacenamiento

· Problemas logísticos de suministro; costes de LN por litro

· Requisitos de supervisión: supervisión manual o automática

· Requisitos de monitorización: directo desde la unidad de autocompletado

· Necesidad de un sistema conforme a la normativa

· Cuestiones ambientales o de seguridad

El número de muestras y el recipiente de muestras (viales, pajillas, bolsas,…) más frecuentemente utilizados a menudo terminan siendo los principales determinantes del tipo de recipiente a escoger.

El almacenamiento de cualquier cantidad significativa de muestras en grandes contenedores como bolsas o cajas indicará una opción de grandes recipientes, mientras que las muestras en pajuelas o viales pueden ser alojado en recipientes más pequeños también.

Pequeños recipientes de almacenamiento

Para estos, todos los fabricantes trabajan de la misma manera las normas de construcción del recipiente de vacío por lo que la elección será de la calidad de los productos, la reputación y los servicios de soporte locales, garantía de vacío y sistema de almacenamiento interno, por ejemplo, bandejas para viales. La elección de un modelo específico implicará capacidad, precio y preferencia personal.

Grandes recipientes de almacenamiento

Los recipientes más grandes son un poco más complicados ya que se pueden ofrecer como unidades básicas con opciones de autollenado, bypass de gas, batería de respaldo, alarmas y monitorización en tiempo real, sistemas de llenado único “one fill all fill” y mucho más.

La mayoría de las instalaciones serán autofill y luego tendrán complementos como sistemas de bypass de gas, conexiones remotas de alarma con o sin respaldo de batería, que depende de la disponibilidad de la ubicación del sitio.

Los recipientes de tipo carrusel son típicos de los modelos de alta eficiencia ofrecida. Luego se necesitan bastidores, torres o recipientes que aprovechen eficientemente el espacio para obtener la máxima capacidad.

La disposición del almacenamiento de los recipientes facilita el acceso a las muestras y a la capacidad total. El uso de bastidores (racks) hace que sea más sencillo acceder a las muestras, pero reduce la capacidad, pero el uso del software de base de datos puede compensar.

Hay varias soluciones para el almacenamiento, desde bolsas en bastidores, cajas en rejillas, frascos en bandejas o en bastones, copas, copas de margarita en botes, latas giratorias, botes abiertos, la lista continúa.

Con la discusión con uno o dos proveedores conocedores de la materia descubrirá las mejores soluciones para cada escenario.

CONTROL DE LA VELOCIDAD DE ENFRIAMIENTO

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Wed, 13 Jun 2018 07:44:55 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (5)

Preguntas clave:

· ¿Cómo se puede controlar la velocidad de enfriamiento de forma reproducible?

· ¿Cuándo es una opción la congelación pasiva?

· ¿Qué es la vitrificación directa?

La velocidad de enfriamiento óptima para una muestra biológica en particular puede estar disponible en la literatura, pero con toda probabilidad, se requerirá alguna modificación del protocolo para adaptarlo a las condiciones y necesidades locales.

Cuando no se dispone de una tasa recomendada, entonces se requerirá un nivel significativo de experimentación, comenzando con tasas notificadas para materiales que son, de alguna manera, similares a las muestras de interés.

Una vez determinada, la tasa requerida se puede lograr de muchas maneras.

Congelación pasiva

La congelación pasiva es una técnica simple mediante la cual el contenedor de la muestra se mantiene en un dispositivo simple pre enfriado a una temperatura que permitirá una transferencia exitosa y directa al entorno de almacenamiento, por ejemplo enfriado a -80 ° C, antes de sumergirse directamente en LN.

La velocidad de enfriamiento alcanzada depende de la temperatura del dispositivo y del medio en contacto con la muestra del recipiente. En una unidad disponible en el mercado, una pieza de espuma se coloca en el interior de la unidad con isopropanol pre enfriado (C3H80) manteniendo frío el fregadero cuando frascos de muestra están incrustados en él. La unidad cerrada se mantiene en -80°C para proporcionar una tasa de congelación nominal de -1°C por minuto.

Este protocolo relativamente poco sofisticado puede funcionar bien para muchos tipos de células o volúmenes más pequeños donde no se requiere refrigeración variable. Es barato en lo que se refiere a equipamiento y dentro de ciertos límites, reproducible, aunque no es lineal. Cuando se requieren velocidades de enfriamiento distintas de 1°C por minuto-1, los laboratorios pueden ser capaces de crear su propio sistema de congeladores que utilizan materiales relativamente simples y baratos.

Como con cualquier equipo diseñado para lograr el éxito en la criopreservación, el volumen de muestra, el tipo de muestra, el medio de congelación, el posicionamiento, el embalaje y el cierre uniforme del envase pueden repercutir en el rendimiento de la temperatura e, inevitablemente, afectar a la eventual supervivencia celular.

Congelación controlada de la tasa (Controlled Rate Freezing)

Muchos tipos de muestras requerirán un control preciso y cuidadosos programas de refrigeración y calentamiento, algunos de los cuales incorporan diferentes velocidades de enfriamiento para ofrecer la máxima supervivencia. Los períodos de mantenimiento a las temperaturas prescritas para el equilibrio también pueden ser parte de estos protocolos más complejos.

En tales casos, los congeladores de tasa controlada (Controlled Rate Freezers) se vuelven necesarios, con opción de múltiples programaciones para asegurar que cada perfil de temperatura de criopreservación sea preciso, reproducible y almacenable para su auditoria y referencia futura.

Un ejemplo de un patrón ampliamente utilizado de enfriamiento controlado comenzaría con el enfriamiento a 4°C, ya que la muestra se somete a un proceso de preparación con procedimientos como la adición de crioprotectores con los viales incrustados en hielo. El próximo paso en el proceso consistiría en reducir la temperatura de manera relativamente rápida (p. ej. 5°C min-1) a una temperatura intermedia que podría mantenerse durante varios minutos para permitir la nucleación del hielo (p. ej. -8°C). A continuación, las muestras se enfriarían lentamente (1°C min-1) a una temperatura base de -40°C. Después de un segundo período de espera de varios minutos, los viales serían retirados rápidamente de la cámara de congelación e inmersos directamente en LN.

El punto en el que realmente comienza la congelación varía entre muestras si no se emplea la nucleación inducida. Con un baño (una inmersión), la nucleación del hielo puede iniciarse de una manera consistente y repetible.

Vitrificación directa

El vitrificado directo para la criopreservación es una técnica mediante la cual muestras de pequeño volumen, típicamente medidas en microlitros, son tratadas con protectores de alta osmolaridad para deshidratar las soluciones citoplasmáticas hasta el punto en que, cuando se enfrían rápidamente, ellos vitrificarán directamente para formar un vidrio en lugar de hacer la transición de fase en hielo cristalino. Este pretratamiento se lleva a cabo comúnmente en hielo y reemplaza la deshidratación lograda en el enfriamiento de velocidad controlada (descrito más arriba). Es una técnica ampliamente utilizada, con éxito, tanto para gametos y embriones de mamíferos.

La duración del tratamiento de deshidratación de pre enfriamiento es, necesariamente limitado debido a la toxicidad y al estrés osmótico, por lo que para conseguir un catión vitrificado se requieren velocidades de enfriamiento ultrarrápidas, a menudo por encima de 5000°C min-1. Esto puede lograrse si la muestra tiene un volumen muy pequeño y si la inmersión en LN es suficientemente rápida, con agitación para asegurar que ninguna burbuja del gas nitrógeno se forma en la superficie de la muestra y se adhiere a ella, produciendo un efecto aislante de Leidenfrost.

Mientras que los portadores de especímenes especializados, cerrados, están disponibles, las velocidades de enfriamiento muy rápidas requeridas a menudo se logran mediante la inmersión directa de las muestras desnudas en LN antes de la transferencia, bajo LN, en un recipiente secundario como un criovial convencional.

Dichos protocolos podrán plantear problemas de contaminación cuando el LN utilizado en la refrigeración y en los recipientes de almacenamiento no sea completamente estéril.

Procedimientos de congelación y descongelación

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Tue, 05 Jun 2018 15:01:42 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (4)

Preguntas clave:

· ¿Por qué debería controlarse la nucleación del hielo?

· ¿Cuál es el papel de un crioprotector?

· ¿Por qué varían los protocolos de criopreservación?

· ¿Es importante la velocidad de descongelación?

Los efectos físicos y biológicos de un proceso de enfriamiento pueden ser tolerados, sin daño, por un rango limitado de especímenes, pero la gran mayoría sufriría una lesión letal sino se emplea algún tipo de protocolo de protección. La mejor manera de protegerse de estos daños es mediante el uso combinado de nucleación controlada del hielo, aditivos como protectores químicos (crioprotectores) y la manipulación adecuada de las tasas de enfriamiento y calentamiento.

Los químicos crioprotectores se agregan a las células inmediatamente antes de comenzar el protocolo de preservación. Penetran en las células, en mayor o menor medida, inhiben la formación de hielo intracelular y protegen contra los efectos dañinos de un citoplasma cada vez más concentrado.

Los crioprotectores pueden ser tóxicos, en diversos grados, para las células y el tiempo de su uso, la concentración y la temperatura de aplicación deben equilibrarse con los beneficios de supervivencia.

Los crioprotectores comunes incluyen dimetilsulfóxido, etanodiol, glicerol y propanediol.

Inmediatamente se nuclea el hielo en la matriz extracelular, las células experimentan un grado de choque osmótico potencialmente dañino a medida que los solutos se concentran en el líquido residual que rodea las células. Esta concentración externa mejorada de solutos causa un movimiento significativo de agua fuera de las células que conduce a lesiones por deshidratación (efectos de la solución). Sin embargo, el riesgo de lesiones se puede minimizar asegurando que el hielo se nuclea a la temperatura más temprana posible, produciendo el nivel más bajo posible de estrés osmótico inicial.

Esta nucleación inducida es necesaria ya que las soluciones se vuelven fácilmente súper-enfriadas, cayendo por debajo de su punto de congelación nominal pero sin la formación de hielo, p. el agua sufrirá el cambio de fase en hielo si se nuclea solo un poco por debajo de 0 ° C, pero puede permanecer sin congelar (súper enfriada) hasta -40 ° C por debajo de cero.

Si se produce un súper enfriamiento significativo antes de la nucleación, se puede esperar un nivel alto e instantáneo de estrés osmótico potencialmente letal.

Hay varias maneras mecánicas de inducir la nucleación, incluida la agitación rápida de viales enfriados, tocar un implemento refrigerado por la parte externa del contenedor de congelación (por ejemplo, pinzas con puntas enfriadas en LN) o acelerar brevemente la velocidad de enfriamiento (un enfriamiento). Algunos congeladores programables tienen un accesorio para efectuar la nucleación. También están disponibles comercialmente diversos aditivos no tóxicos que inducirán la nucleación a la temperatura más alta posible en soluciones enfriadas adecuadamente.

Una vez que el hielo se nuclea, la temperatura de la muestra, inevitablemente, comenzará a aumentar debido al calor latente liberado durante la formación de hielo (exotermia). Si no se controla, este aumento de la temperatura puede ser perjudicial, ya que la proporción de hielo en el sistema fluctúa; de modo que el protocolo de enfriamiento debe adaptarse para minimizar este aumento, típicamente mediante un aumento en la velocidad de enfriamiento al menos hasta que se elimine la exotermia del calor latente.

Después de que se nuclea el entorno extracelular, el siguiente desafío en el protocolo es controlar la velocidad de enfriamiento para garantizar que se produzca la cantidad necesaria de deshidratación celular protectora. Habrá velocidades de enfriamiento lentas que producen demasiado estrés osmótico debido a la duración de la exposición al hielo extracelular y las tasas de enfriamiento rápido que limitan la deshidratación y aumentan la probabilidad de formación letal de hielo intracelular a niveles inaceptables. En el medio habrá una tasa de enfriamiento "óptima" que mantenga ambas tensiones en niveles aceptables.

Es posible que sea necesario variar la velocidad de enfriamiento durante el protocolo, que deberá determinarse para cada tipo de célula diferente. El objetivo es eliminar suficiente agua de la célula para permitir que el agua en el citoplasma concentrado se vitrifique a medida que avanza el enfriamiento, es decir, se forma un "vidrio" menos perjudicial en lugar de hielo altamente dañino, cristalino. Típicamente, el enfriamiento para lograr la deshidratación continúa hasta una temperatura base entre -35 y -45 ° C antes de que la muestra se sumerja directamente en LN.

En la mayoría de las situaciones, el calentamiento rápido es esencial para una buena supervivencia celular, con tasas subóptimas que aumentan la probabilidad de formación de hielo intracelular a medida que la muestra se descongela, con la pérdida inevitable de la viabilidad. Los recipientes de muestra más pequeños, como los crioviales, pueden sumergirse en agua a 37 ° C y monitorearse visualmente hasta que los últimos cristales de hielo se hayan derretido. Pequeñas variaciones del perfil de calentamiento requerido pueden causar una pérdida significativa de viabilidad, por lo que las muestras deben transferirse directamente desde LN al baño de calentamiento. El control de volumen y calentamiento del baño debe evitar cualquier reducción significativa de la temperatura debido a la introducción de la muestra. Una vez descongelada, es posible que deba enjuagarse una muestra para eliminar los crioprotectores y también puede necesitar tiempo para reparar las lesiones. Una temperatura de incubación reducida, evitar temblores y el almacenamiento en la oscuridad pueden ser útiles en esta etapa.

Una cantidad de dispositivos semicontrolados para ayudar y controlar el proceso de descongelación están llegando al mercado. La viabilidad debe evaluarse inmediatamente después de la descongelación y, a continuación, debe vigilarse con frecuencia a medida que el nivel disminuya, ya que las células dañadas pueden no repararse y recuperarse. En particular, los ensayos histoquímicos ligados a enzimas pueden sobreestimar la supervivencia ya que las enzimas activas pueden persistir en células dañadas que no pueden reparar y, posteriormente, morir. La documentación para la muestra congelada debe indicar el rendimiento esperado en la recuperación, p. niveles de actividad enzimática, y solo cuando esto se ha logrado se puede calcular la "supervivencia" final.

Eventos físicos durante la crioconservación

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Wed, 23 May 2018 11:56:36 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (3)

Preguntas clave:

¿Qué sucede con las muestras cuando se les congela el agua?
¿Por qué se deshidratan las células durante la congelación?
¿Por qué algunas células son dañadas por el congelamiento?
¿Importa la velocidad de enfriamiento?

Para entender los diferentes elementos que contribuyen al éxito de un proyecto de criopreservación, es útil considerar el protocolo progresivo de secuencia de cambios físicos y químicos que ocurren en el material biológico (y alrededor) durante el procesamiento.

Desde un punto de vista criobiológico, una muestra puede verse como contiene dos partes discretas, y la secuencia de eventos que ocurren dentro de estos durante la criopreservación es diferente. En primer lugar, está el ambiente intracelular que consiste en el ambiente interno de las células encerradas en sus membranas celulares limitantes.

En segundo lugar, está el entorno extracelular que incluye eñ líquido en el que están suspendidas las células o, en el caso de los tejidos, la matriz líquida que existe entre las células individuales.

Para muchos tipos de células, el enfriamiento y conservación en nitrógeno líquido (LN) puede ser relativamente sencillo, sin embargo, como consecuencia del proceso de enfriamiento y antes de que ocurra cualquier congelación, las membranas de ciertos tipos de células pueden dañarse (por ejemplo, algunos tipos de espermatozoides de mamíferos). Esto se conoce como lesiones después de la congelación y puede contribuir a aumentar las posibilidades de que se produzcan efectos letales. Es un fenómeno bien conocido y las formas de minimizarlo se documentan a menudo para cada célula involucrada. Es importante ser claro en cuanto a si tal lesión por frío se aplica a los tipos de células que se propone utilizar, ya que este fenómeno puede limitar el rendimiento de una determinada criopreservación.

El agua será el componente predominante en casi todas los sistemas biológicos que se preservan y la dificultad crítica en la criopreservación resulta de la transición de fase cuando las soluciones acuosas están enfriadas debajo de su puntos de congelación, es decir, cuando el agua líquida se convierte en hielo cristalino.

El agua que se convierte en hielo ya no puede formar parte de la reacción química normal, y su eliminación del líquido original fase concentra los solutos disueltos en un residuo más pequeño volumen. A medida que el enfriamiento progresa y se forma más hielo, la solución residual se vuelve cada vez más concentrada.

Durante la crioconservación, a velocidades de enfriamiento lentas a moderadas, el hielo se formará primero en la matriz extracelular. Los solutos no pueden ser incorporados a los cristales de hielo para que, al formarse, un concentrado, se desarrollará líquido residual que impondrá tensiones osmóticas en las células, y comenzarán a deshidratarse. Si no se controla estos las tensiones (a menudo referidas como efectos de la solución) pueden causar daños o lesión celular. Un resultado positivo de esta deshidratación es que el el citoplasma se volverá cada vez más concentrado, reduciendo riesgo de formación de hielo dentro de las células. El hielo intracelular es inevitable letal y puede ocurrir ya que la temperatura continúa reduciéndose si esto la deshidratación es insuficiente.

Si la velocidad de enfriamiento durante la criopreservación es demasiado rápida entonces habrá poca o ninguna oportunidad para la deshidratación y la congelación intracelular se vuelve inevitable.

El desafío de la criopreservación exitosa es encontrar un procedimiento de enfriamiento que proporciona deshidratación protectora durante enfriamiento, y evita la congelación dentro de las células. Si el progresivo la deshidratación durante el enfriamiento es efectiva el agua restante en el la célula se formará en un vaso (vitrificación) una vez que la transición al vidrio* la temperatura para la solución ha sido alcanzada. Esto debería causa un daño mínimo y evita la formación letal de hielo. En un protocolo típico de crioconservación esta deshidratación será logrado en algún lugar entre el punto cuando el hielo extracelular se forma primero (nucleación) y, aproximadamente, -40 ° C. Directo la transferencia de -40 ° C a LN asegurará una refrigeración lo suficientemente rápida para lograr con éxito el paso de vitrificación final.

*Transición vítrea: es la conversión directa, o cambio de fase, del agua líquida en un vidrio vítreo en lugar de un vidrio vítreo. que el hielo cristalino. Temperaturas inferiores al punto de transición vítrea (Tg) de las soluciones de agua de polioles, alrededor de - 136°C, parecen ser aceptados como el rango después del cual la actividad biológica se ralentiza enormemente; -196°C (la ebullición de nitrógeno líquido), es la temperatura preferida para almacenar muestras importantes. Mientras los refrigeradores, los congeladores y los congeladores extra-fríos se utilizan para muchos artículos, generalmente el ultrafrío de nitrógeno líquido se requiere para la preservación exitosa de las estructuras biológicas más complejas.

Conceptos iniciales

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Wed, 16 May 2018 18:07:12 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (2)

La criopreservación tiene muchas aplicaciones, en entornos clínicos y agrícolas, en la investigación, el desarrollo, la producción y la operación. En un contexto biológico, es el almacenamiento prolongado de células, tejidos y órganos congelados a baja temperatura para mantener la estructura, la viabilidad y la función, junto con la estabilidad genética a largo plazo. La temperatura reducida reduce el cambio químico/bioquímico al limitar la energía química disponible en el sistema. Cuanto más baja sea la temperatura de almacenamiento, menor será la probabilidad de cualquier cambio químico.

La función de una instalación de criopreservación es llevar las muestras biológicas a la temperatura ultra baja requerida sin comprometer su viabilidad , y luego almacenarlas en condiciones constantes hasta que sea necesario . También deben existir procedimientos de recuperación adecuados.

Por razones prácticas, sobretodo la disponibilidad y el coste, el nitrógeno líquido (LN) a -196°C es el medio estándar aceptado para el almacenamiento a temperaturas ultra bajas, proporcionando tiempos de almacenamiento en congelador que pueden medirse en al menos décadas.

Dependiendo del uso al que se destine el material almacenado, también pueden ser apropiadas temperaturas de hasta -80°C, pero nos centraremos en sistemas en los que el nitrógeno líquido (LN) es el criogénico de elección.

La necesidad de congelar las muestras biológicas puede variar desde el almacenamiento a corto plazo de relativamente pocas muestras de la investigación en un laboratorio pequeño, hasta el almacenamiento a largo plazo de grandes cantidades de datos críticos para el proceso (en vapor LN controlado y supervisado) en grandes recipientes de almacenamiento.

La criopreservación puede ser simple en concepto, pero se añade complejidad por una serie de cuestiones que deben tenerse en cuenta a la hora de establecer un repositorio congelado, a cualquier escala. Estas cuestiones incluirán l as propiedades físicas y biológicas de la muestra, su valor, la duración propuesta del almacenamiento y el tipo de contenedor para muestras a utilizar. Además, la necesidad de reproducir el proceso, la accesibilidad a las muestras en cualquier momento y el impacto de los requisitos legales deben tenerse también muy en cuenta.

¿Empezamos?

joaquin@kryosfera.com (Joaquin Fernandez) — Wed, 16 May 2018 16:23:01 GMT

Guia para operar instalaciones de crioconservación (1)

Arrancamos esta serie de entradas donde ofreceremos una introducción a las cuestiones clave que deben tenerse en cuenta al establecer o mantener en funcionamiento un centro de crioconservación y almacenamiento de células, órganos y tejidos vivos.

Su contenido será igualmente aplicable a animales, plantas, industria alimenticia y material microbiano y es relevante tanto para operaciones grandes como pequeñas.

Está dirigido a directivos y científicos con poco conocimiento previo y se ocupa de la biología, las instalaciones y los procedimientos operativos necesarios para el éxito del servicio de criopreservación y almacenamiento.

Desde Kryosfera queremos que sea de utilidad para todos vosotros, tanto si teneis conocimientos avanzados como si estais empezando.

¡Empezamos!

¿Porqué MVE Chart?

Wed, 16 May 2018 16:22:59 GMT

Breve historia de una elección.

Desde el principio teníamos claro que, en nuestra solución principal, queríamos trabajar con uno o dos fabricantes solamente, porque consideramos que, para de verdad aportar valor, se ha de conocer muy bien el producto y debes confiar ciegamente en él. Con esa idea y después de "pulsar" el mercado buscando innovación, experiencia y rendimiento nos encontramos con MVE Chart.

Como en mi caso, que vengo del sector tecnológico, un buen partner focalizado es un gran aliado en un país de territorios como España, por eso, en cuanto nos pusimos en contacto con ellos nos dieron su total soporte y nos animaron a lanzarnos a la aventura con la premisa de "hacerlo diferente". Con ese ánimo y la ilusión del que estrena zapatos nuevos arrancamos. Se trata de una aventura de formato pequeño, el equipo lo que pretende es que el cliente aprecie la calidad por encima de la cantidad, que nos tuteemos y que seamos algo más que un proveedor de tanques y accesorios crio.

Muchas novedades y grandes cosas están por venir, tanto en relación a nuevos equipos/fabricantes como en soluciones novedosas que harán que el sector siga generando empleo y aventureros como nosotros tengamos espacio de crecimiento.

Mientras llegan, que nos encuentren trabajando para y por vosotros.

Nos vemos pronto.